Aislamiento del polimorfonuclear neutrófilo de saliva por técnica de enjuague oral / Isolation of salivary polymorphonuclear neutrophil using an oral rinse technique

PROPOSITO: estandarizar una técnica sencilla y útil para el aislamiento del polimorfonuclear (PMN) neutrófilo de saliva. METODOS: el tipo de estudio fue descriptivo correlacional, con diseño no experimental. Se seleccionaron 20 pacientes, periodontalmente sanos, que no hubieran recibido terapia antibiótica durante los últimos 6 meses, que no tuvieran aparatología ortodóntica, ni resfriados al momento de la realización de la prueba. A cada individuo se le realizó un sondaje para determinar su estado periodontal; se enjuagaba la boca con agua destilada y, luego de una hora se enjuagaba 5 veces con solución de Hanks libre de calcio y magnesio con bicarbonato al 2.2g/lt y gelatina al 0.1/100 la solución recolectada se centrifugó a 1600 r.m.p. por 5 minutos. El botón obtenido se resuspendió en 30 ml de solución de Años, parecer centrifugado nuevamente; finalmente, el botón celular se suspendió en 1ml de la solución de Hanks. A partir de esta suspensión, se realizaron las pruebas de porcentaje de viabilidad y pureza y conteo celular. RESULTADOS: utilizando estadísticas descriptivas para el análisis de los datos, se encontró un número promedio de células aisladas de 6.962.000 células ml, con un porcentaje promedio de viabilidad del 93.33/100 y de pureza del 83.41/100. CONCLUSIONES: estos resultados sugieren que la técnica de aislamiento de PMN neutrófilos es efectiva, ya que proporciona un número adecuado de células, con porcentajes altos de viabilidad y pureza, para ser utilizadas en pruebas de laboratorio.

Efecto de la cocaína y las catecolaminas sobre la quimiotaxis y la quimioluminiscencia de neutrófilos humanos in vitro

El objetivo fue determinar el efecto de la cocaína sola y mezclada con catecolaminas sobre la quimiotaxis y la explosión metabólica de los neutrófilos humanos y evaluar si la cocaína se une a estas células. La quimiotaxis se realizó en un gel de agarosa utilizando el péptido quimiotáctico FMLP. La explosión respiratoria se determino mediante la cuantificación de fotones (quimioluminiscencia) emitidos por las celulas activadas con PMA. Para cada prueba, las celulas se expusieron a concentraciones de cocaína de 1 a 1000ug/m y de catecolaminas 0.001 y 0.001 ug/mL y luego a la mezcla de 1000 ug/mL de cocaina con 0.001 ug/mL de catecolamina. La union de la cocaina a las celulas se evaluó mediante un ensayo de competición, con cocaína tritiada 10 nM y cocaína no radioactiva 500 uM. Los resultados no mostraron efecto de la cocaína quimiotaxis, pero sí aumento estadisticamente significativo (p=0.004), de la quimioluminiscencia de los neutrófilos tratados con 1000ug/mL de cocaína. Los valores de quimioluminiscencia sin cocaína fueron 1.2 x 10 a la 6 ñ 10 a la 4 cuentas por minuto (cpm) y con cocaina 1.7 x 10 a la 6 ñ1 x 10 a la 5 cpm. Las catecolaminas no modificaron los resultados obtenidos con la cocaina sola. La union de la cocaína tritiada a los neutrofilos tuvo un valor de 3.893 ñ 343 cpm, que disminuyó significativamente a 301 ñ 124 cpm en el ensayo de competición (p=0.008). Se demostró un incremento en la actividad metabólica de los neutrofilos inducido por cocaína, al parecer por su union a estas celulas. Estos resultados no son extrapolables a la clínica; sin embargo, el aumento de quimioluminiscencia debe ser tenido en cuenta, puesto que la exposición recurrente a la cocaína podría eventualmente conducir al mismo efecto